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    使用 Arium超純水系統 最大限度地減少 LCMS干擾

    點(diǎn)擊次數:188  更新時(shí)間:2024-05-31

    LC-MS輕松拿捏,實(shí)驗“水到渠成"


    生物制藥領(lǐng)域,尤其是在研發(fā)和生產(chǎn)上游階段,精確和可靠性是實(shí)驗成功的關(guān)鍵。從細胞培養到抗體藥物的生產(chǎn),每一個(gè)步驟都對實(shí)驗條件有Ji高的要求。在這些過(guò)程中,實(shí)驗用水的純凈度尤其重要,因為它直接影響到實(shí)驗的結果。


    在生物制藥的上游實(shí)驗室中,通常會(huì )進(jìn)行多種關(guān)鍵實(shí)驗,比如細胞培養、分子生物學(xué)實(shí)驗和蛋白質(zhì)純化和分析,這些實(shí)驗對純水都有不同程度的要求,水中的任何雜質(zhì),如有機物、DNA酶、離子等都可能對實(shí)驗結果產(chǎn)生負面影響:


    細胞培養


    水中的有機污染物可以作為外源性生長(cháng)因子或抑制劑,影響細胞的代謝和生長(cháng)動(dòng)態(tài)

    分子生物實(shí)驗


    微量的DNA或RNA污染可以引起PCR實(shí)驗中的非特異性擴增,從而影響實(shí)驗結果的準確性和重復性

    蛋白質(zhì)純化和分析


    水中污染離子可以與蛋白質(zhì)相互作用,改變其電荷狀態(tài),影響蛋白質(zhì)的分離和鑒定

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    分析設備對實(shí)驗室水質(zhì)有較高要求

    液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS)是生物制藥實(shí)驗室中常用的分析設備,其實(shí)驗中對水質(zhì)的要求尤其嚴格。低質(zhì)量的水可能引入背景噪音,干擾色譜和質(zhì)譜的讀數,影響數據的準確性和重復性。

    有機化合物的影響


    1


    靈敏度降低:有機化合物與分析物競爭固定相的活性位點(diǎn),降低分析物的保留量,降低方法的靈敏度

    2


    假峰和分離干擾:有機化合物的堆積可導致假峰的產(chǎn)生,干擾色譜分離過(guò)程

    3


    影響分析準確度:污染物長(cháng)期積聚形成新的固定相,導致峰拖尾和保留時(shí)間的變化

    細菌和生物膜污染


    1


    色譜柱易堵塞:由細菌和生物膜殘留物引起,影響流動(dòng)相的流動(dòng)性和色譜性能

    2


    結果受干:細菌產(chǎn)生的有機副產(chǎn)物如熱原和酶類(lèi),可導致色譜結果的干擾

    無(wú)機污染的影響


    1


    背景噪音增加:例如堿離子的過(guò)量存在可能改變分析結果,增加背景噪音

    2


    影響分離度:水中的離子污染物可能改變溶液的離子強度,進(jìn)而影響色譜分離的特性,包括電導率和溶液的化學(xué)物理性質(zhì)






    在本次應用案例中,使用賽多利斯Arium® Mini UV超純水系統處理的水在LCMS分析中表現出色。與市售的瓶裝LCMS級水和設施中的去離子水相比,Arium® 水能顯著(zhù)降低背景水平,提高分析靈敏度,結果更為精確和一致。

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    實(shí)驗結果



    提供高質(zhì)量的色譜分析用水

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    圖1:總離子色譜圖(TIC;1;TOF MS(400-7,000),95 V ESI+),質(zhì)譜數據(2;平均時(shí)間2.1751 min,TOF MS(400-7,000),95 V ESI+:組合)來(lái)自單克隆抗體樣品和紫外線(xiàn)痕跡(3;通道名稱(chēng):TUV 280)

    所用系統為:配備有BioResolve™RP mAb Polyphenyl色譜柱的Waters BioAccord™ LCMS

      在實(shí)驗中,比較了全新打開(kāi)的LCMS級瓶裝水、Arium® 水和內部設施去離子(DI)水的性能。LCMS級和Arium® 水表現出了類(lèi)似的高質(zhì)量色譜圖,證明它們適合進(jìn)行精確的LCMS分析。相比之下,去離子水的色譜圖顯示出較高的背景水平和微小的峰面積差異,暗示該水源可能含有雜質(zhì)如總有機碳(TOC)、無(wú)機物和細菌,這可能影響分析的準確性和可靠性。

      考慮到LCMS級瓶裝水一旦瓶裝水被打開(kāi),其水質(zhì)可能會(huì )因多種因素而下降,這需要在實(shí)驗設計和操作中特別考慮,同時(shí)成本也是考量的一大因素。



      Arium® 純水讓上游實(shí)驗中的樣本分析結果更清晰




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      圖2:總離子色譜圖(TIC;1,TOF MS(400–7,000),95 V ESI+)和用Arium®-水制備的單克隆抗體樣品的質(zhì)譜圖(平均時(shí)間2.1418分鐘(UV3)和2.1668分鐘(PERF),2,TOF MS(400–7,000),95 V ESI+:組合)。

      賽多利斯Arium® 實(shí)驗室純水的具備優(yōu)越性能和可靠性,已被廣泛應用于上游實(shí)驗室的LCMS應用中。圖2展示了從生物反應器內和灌注液路線(xiàn)(PERF)采集的CHO細胞培養物樣本的完整質(zhì)量分析結果??梢郧宄赜^(guān)察到兩個(gè)樣本中糖型豐度的微小差異,以及較低的背景噪音,這些特點(diǎn)使得分析結果更加清晰和容易解讀。

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      結論

      在追求高質(zhì)量生物制藥研究和生產(chǎn)過(guò)程中,選擇合適的實(shí)驗材料和條件是成功的關(guān)鍵。Arium® 系列超純水系統提供的高標準純水,為生物制藥上游的各種實(shí)驗提供了強有力的支持,可以獲得更優(yōu)的色譜性能,同時(shí)提高了實(shí)驗的準確性和效率。

      選擇高質(zhì)量的純水系統,是確保生物制藥研發(fā)精準高效的明智選擇。


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